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一、扩增
1、LB培养基5ml;
2、抗生素:1000X,即1:1000比例。种类根据细菌抗性决定;
3、菌体:看浑浊度,1%-5%,取500ul于其中;
4、37℃摇床220转,过夜,12-16h。
二、纯化质粒DNA
1、1.5ml离心管,编号一定要写清楚;
2、加满离心管,离心12000xg. 1min,弃上清。取三次;
3、加Buffer S1 200ul,溶解沉淀,5min;
4、加S2(用完立刻盖紧瓶盖,以免CO2中和Buffer中的NaOH) 200ul,不能剧烈(以免基因组DNA的污染),上下翻转4-6次,直至形成透亮的溶液,时间少于5min。目的是使蛋白包裹基因组DNA,游离质粒;
5、加S3 280ul,温和充分翻转混合6-8次,12000xg,10min(此步呈白色絮状);
*备注:S1:S2:S3=5:5:7
6、取上清加入制备管(置于2ml离心管),12000xg,1min,去滤液;
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7、加Buffer W1 500ul,12000xg,1min,弃滤液;
8、加Buffer W2 700ul,12000xg,1min,弃滤液。重复一遍;
9、空管离心12000xg,1min;
10、制备管移入新的1.5ml离心管,管膜中加60-80ul去离子水,静置1min,12000xg,1min。(将去离子水加热至65度,将提高洗脱效率)
三、酶切体系
EcoRⅠ
1ul
如需要6管,则先统一配7管的量,再分别加入
酶的总量不宜超过总体系的10%,以防星活性的发生
BamHⅠ
1ul
Buffer EcoRⅠ
5ul
以此定体系,稀释成1X的就好
BSA
0.5ul
使其终浓度为100ug/ul(1X)
去离子水
30.5ul
定容至Buffer EcoRⅠ1X的量
Plasmid
12ul
量要足够
Sum
50ul
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37°两小时以上即可
四、跑胶回收:sost回收失败
1、2%浓度胶,Loading Buffer如是6X,则加10ul到样品,全部加样到胶孔中。
插入:配胶方法
大块胶60ml;小块胶25ml;
需要配置大块胶、大孔胶;
Agarose 0.6g,TAE60ml,微波中火2min;
趁热但不烫手时加入gold view 0.5ul/25ml;
第 4 页
倒入槽里。
2、跑胶:单位厘米/5-10v。所以大槽25cm,150v即可。小槽100v即可。
3、紫外灯下切胶,纸巾吸进液体,计算凝胶重量(1mg=1ul);
4、加3个凝胶体积的凝胶结合液DB(0.1ul视为100ul;如凝胶浓度大于2%,则加入6倍体积溶胶液;凝胶块最大不能超过400ul,超过可多个离心柱);
5、56℃水浴放置10分钟,至完全溶解;
6、每100mg最初的凝胶重量加入150ul
第 5 页
的异丙醇,震荡混匀,回收大于4Kb的片段可不加异丙醇,加入反而降低回收效率;
7、将上一步所得溶液加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中),12000rpm,30-60s,弃液体;
8、加700ul漂洗液WB,12000rpm,1min,弃废液;
9、加500ul漂洗液WB,12000rpm,1min,弃废液;
10、空离心2min,弃废液;
11、晾干乙醇,以免抑制下游反应;
第 6 页
12、将吸附柱放入新的1.5ml离心管,加入50ul(最少30ul)洗脱缓冲液EB或者去离子水(65-70水浴加热效果更好,或将得到的溶液重新加入离心柱可增加洗脱量);
五、连接体系:
pLXSN Amp+
1
3
5
pLXSN Amp+
S100P
NOG
DKK
对照
Insert
7ul
3ul
7ul
0ul
Vector—pLXSN
1ul
1ul
1ul
1ul
T4连接酶
1ul
1ul
1ul
1ul
Buffer
1ul
1ul
1ul
1ul
去离子水
0ul
4ul
0ul
7ul
第 7 页
pLRES2 Kana+
2
4
6
pLRES2 Kana+
S100P
NOG
DKK
对照
Insert
7ul
3ul
7ul
0ul
Vector—pLRES2
1ul
1ul
1ul
1ul
T4连接酶
1ul
1ul
1ul
1ul
Buffer
1ul
1ul
1ul
1ul
去离子水
0ul
4ul
0ul
7ul
16℃ 过夜
六、转化
1、加感受肽:连接产物=10:1,冰浴30min;
第 8 页
2、激活:42℃,90s,不能震动;
3、加500ul LB培养基;
4、37℃,150转摇床,45min;
5、铺板子
七、检测
1、细菌长势良好,对照组不长;
2、酶切检测:
(1)1ml LB体系:1ml LB培养基+1ul抗生素于1.5mlEP管中;
(2)15ul Pcr体系:7.5ul Mix(2X)
5.5ul water
第 9 页
1ul上游引物
1ul下游引物
(3)用枪头挑培养皿中的菌体,吹打于1ml LB体系中,再吹打于15ul Pcr体系中;
(4)1ml LB体系放入37℃摇床,150rpm;
(5)15ul Pcr调节:
360酶
Promega酶
步骤
温度℃
时间
步骤
温度
时间
1
94
0:02:00
1
95
0:02:00
2
94
0:00:30
2
95
0:00:30
3
60(可调节)
0:00:30
3
60
0:00:30
4
72
0:00:45
4
72
0:00:45
5
GOTO
2 REP 34
5
GOTO
2 REP 34
6
72
0:10:00
6
72
0:10:00
7
HOLD 4.0°
ENTER
7
HOLD 4.0°
ENTER
第 10 页
显示4°/4°时,结束。
(6)Pcr显示有结果,则将相对应的1ml LB体系扩增,见步骤一、扩增;
(7)重复步骤二、纯化质粒DNA;三、酶切体系;四、跑胶但不回收;
(8)有结果则证明之前的酶切、连接、转化成功。
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hexagonal 六角形的,六边形的 Huxley 赫胥黎,朱利安爵士hexacoral 六射珊瑚2023-07-01 04:06:152
2010年珠海东信和平待遇如何?
待遇在珠海算是中等偏上,要看你是什么职位,品质工程师你期待是5K?建议你尝试面试一下,也许会有这个水平,但是几率还是有的。不管你以前做过什么,关键是你现在能做什么,做得到了什么?能者多得!技术人员的工资相对比较高一点,但是根据个人的层次和表现会有差别!年薪几十万到几万的都有的,应该是这样!祝你好运。2023-07-01 04:06:223
东信和平科技股份有限公司发展怎么样
东信和平主营业务为:生产和销售移动通信用智能卡、非接触式智能卡及配套应用系统等高端产品。虽然高端,但该行业竞争十分激烈,导致该行业整体盈利能力下滑。从东信近四年主要的财务指标分析,该公司“越来越危险”,已经失去作为一家优秀公司的资格,只能算作一家中规中矩的公司。2023-07-01 04:03:052
国内大型著名的期货公司有哪些
根据2019年期货业协会的分类评级结果,目前国内有149家期货公司,其中AA类的14家、A类的23家、BBB类的35家、BB类的30家、B类26家、CCC类的8家、CC类4家、C类2家、D类7家。其中,AA类的是:1、永安期货 AA 2、中信期货 AA 3、国泰君安 AA 4、银河期货 AA 5、国投安信期货 AA 6、方正中期期货 AA 7、浙商期货 AA 8、光大期货 AA 9、华泰期货 AA 10、广发期货 AA 11、海通期货 AA 12、中粮期货 AA 13、申银万国 AA 14、南华期货 AA 温馨提示:所有金融类衍生品的投资都具有风险性,对于投资者的金融风险管理能力有着较高的要求,不适合没有专业金融知识的投资者。除了基础的金融知识外,投资者还应做到自身风险承受的控制,不可盲目的进行投资。应答时间:2021-02-23,最新业务变化请以平安银行官网公布为准。 [平安银行我知道]想要知道更多?快来看“平安银行我知道”吧~ https://b.pingan.com.cn/paim/iknow/index.html2023-07-01 04:02:471
东信和平智能卡股份有限公司的经典产品
东信和平智能卡股份有限公司“龙游”系列 - “龙游”OTA卡 “龙游”OTA卡符合以下标准和规范:ISO/IEC 7816-1:1987,7816-2:1988,7816-3:1989GSM 11.11 version 8.3.0 Release 1999GSM 11.14 version 8.3.0 Release 1999中国移动通信STK卡OTA下载梦网短信业务菜单实现方案中国移动通信STK卡梦网短信业务菜单OTA下载实现方案(二阶段)“龙游”OTA卡支持以下功能:支持GSM PHASE II+ STK功能,满足各类IOD及普通STK应用。支持超级号簿、短信群发、一卡多号、电话本扩展、自编菜单、主副卡、手机银行等多种特殊应用支持RFM(远程文件管理)和STK菜单动态下载与远程应用管理支持多种鉴权算法,包括COMP128-V1/V2/V3/V0(注)、XOR、可下载运营商自定义新算法特有cardACS(注)安全保护技术,支持鉴权计数器等多种防克隆及探测机制,可有效防范各类克隆工具的攻击特有cardDPS-II(注)数据保护技术,可有效保护用户数据和延长SIM卡使用寿命特有cardSMM(注)智能动态存储管理技术,对OTA技术提供完美匹配。支持DES、TDES、PBOC和MAC等多种应用加密算法和信息安全机制注:V0算法是指中国移动(CMCC)制定的增强型安全技术鉴权算法。cardACS:新一代SIM卡安全保护技术。cardDPS-II:第二代数据保护系统。智能保护SIM卡内的重要数据,有效防止数据丢失、损坏。cardSMM:智能动态内存管理技术,有效提高OTA应用空间的利用率、存取速度等。 “龙游”OTA卡适用于GSM运营商发行的不同容量的OTA卡,“龙游”OTA卡提供的信息点播、手机银行、位置服务等各种服务已在移动梦网、动感地带等产品上得到广泛应用。东信和平可以为移动运营商提供版面设计、卡体印刷、卡片的生产及个人化、个性化包装等一条龙服务。还可提供营业厅SIM卡检测工具、桌面型个人化系统等配套产品和服务,并可按用户需求进行定制开发。“龙游”OTA卡已广泛应用于中国移动等多个国内外GSM运营商,并获得了用户的信赖和好评。东信和平全体员工竭诚为您提供高质量的产品和服务。2023-07-01 04:02:411
邓川是谁?东信和平独立董事
邓川:男,1973年生,中国共产党党员,会计学专业博士、教授,浙江省十三五特色专业“审计学”专业负责人,现任公司独立董事、浙江财经大学会计学院院长、硕士生导师,中国会计学会财务成本分会常务理事,浙江省内部审计协会副会长,浙江省注册会计师协会内部治理指导委员会委员。目前同时还兼任绍兴兴欣新材料股份有限公司、浙江海亮股份有限公司独立董事。2023-07-01 04:02:341
东信和平
【2009-12-11】 刊登2009年度配股发行方案提示公告,继续停牌 东信和平2009年度配股发行方案提示公告 1、本次配股简称:东信a1配;配股代码:082017;配股价格:4.6元/股。 2、东信和平配股缴款起止日期:2009年12月7日-2009年12月11日的深圳证券交易所正常交易时间,请股东注意申购时间。 3、本次配股网上认购期间,公司股票停牌;2009年12月14日验资,公司股票继续停牌;2009年12月15日将公告配股结果,公司股票复牌交易。 4、配股上市时间在配股发行成功后根据深交所的安排确定,将另行公告。2023-07-01 04:02:273
全国十大期货公司排名
根据2019年期货业协会的分类评级结果,目前国内有149家期货公司,其中AA类的14家、A类的23家、BBB类的35家、BB类的30家、B类26家、CCC类的8家、CC类4家、C类2家、D类7家。其中,AA类的是:1、永安期货 AA 2、中信期货 AA 3、国泰君安 AA 4、银河期货 AA 5、国投安信期货 AA 6、方正中期期货 AA 7、浙商期货 AA 8、光大期货 AA 9、华泰期货 AA 10、广发期货 AA 11、海通期货 AA 12、中粮期货 AA 13、申银万国 AA 14、南华期货 AA 温馨提示:以上解释仅供参考,排名不分先后。应答时间:2020-08-11,最新业务变化请以平安银行官网公布为准。[平安车主贷] 有车就能贷,最高50万https://b.pingan.com.cn/station/activity/loan/qr-carloan/loantrust.html?source=sa0000632&outerSource=bdzdhhr_zscd&outerid=ou0000250&cid=bdzdhhr_zscd&downapp_id=AM0010000652023-07-01 04:02:251
东信和平:超级SIM卡龙头,数字货币产品验证中
(关注原因:中线,公司为中国电子 科技 集团有限公司旗下公司,数字货币产品验证中) 1、超级SIM卡内含加密芯片以及NFC功能,线下可充当饭卡、门禁卡、交通卡、车钥匙;线上可以进行金融安全认证、5G电子签名以及大额转账等。 它可以将SIM卡与货币融合,钱包化,安全需求超越了通信范畴,达到货币级别,可以实现超级SIM个人化生产、安全性达到EAL4+以上等级,通过EMVCo认证或通过银联芯片卡集成电路安全测试,且通过国密二级以上(含)认证,成为真正的货币载体。 此外超级SIM卡还拥有大容量储存功能,以紫光集团推出的5G超级SIM卡为例,该SIM卡结合存储卡与SIM卡的功能,存储容量高达128G。除此之外,该超级SIM卡还具有金融级安全能力,通过此卡,用户可以将个人数据储存在卡中,在匹配移动应用实现实时安全备份和卡交换。 2、央行数字货币(DCEP)使用试点加速,“DCEP芯片卡”,包括可视蓝牙IC卡、IC卡、手机eSE卡、手机SD卡、手机SIM卡等5种形态,可辅助进行数字法币兑回、圈存、交易、查询等功能,是满足DCEP双离线支付技术不可或缺的一环,此外 5G超级SIM卡可与数字货币支付应用相融合 ,形成5G超级SIM卡数字货币钱包,突破目前仅以应用软件形式存在的“钱包”,从芯片层加密存储,同时实现“数字资产安全存储”和“身份安全认证”。 目前相关运营商已经开始加速超级SIM卡的推广,如2021年6月16日,中国移动集中采购1.114亿张超级SIM卡,武汉天喻、恒宝、楚天龙、 东信和平等8家企业中标。 3、公司 实控人为中国电子 科技 集团有限公司 ,公司的主要业务为数字信息安全产品及系统解决方案。 公司自成立以来,始终坚持发展以智能卡为基础的信息安全产业, 是全球五大智能卡公司,通信卡市场份额位居国内第一 。主要产品分为通信SIM卡、金融IC卡、政府公共事业卡(社保卡、市民卡、城市一卡通、身份证等)。 智能卡业务:移动通信方面主要产品为M2M、NFC-SIM、USIM等,主要的业务对象为电信运营商;金融支付方面主要产品为金融IC卡,包含行业工艺卡、创新工艺卡、高端定制卡等,主要业务对象为银行等金融机构;政府公共事业方面主要产品为身份证、 社会 保障卡、电子护照、居民 健康 卡、ETC记账卡、交通卡等。 数字身份安全产品及行业解决方案:公司充分发挥在数字身份识别与数据安全管理方面深厚的技术优势,聚焦物联网及信息安全产业,为市场提供数字身份安全模块(eSIM、eSE、RFID产品)、数字安全管理平台及行业解决方案;主要项目包括:垂直行业安全芯片项目、物联传感标签项目、移动写卡系统业务、数字安全平台RSP平台业务等。 4、公司 数字人民币相关的产品主要有可视智能卡产品及相关技术的应用 ,上述产品现处于测试或研发阶段;公司有数字货币钱包硬钱包应用专利和数字货币密钥数据查询获取方法及装置专利。 (相关资料来自公司公告,太平洋证券等)欢迎来韭菜公社—研究共享 茁壮成长关注我!2023-07-01 04:02:201
郑晓东是哪里的?东信和平独立董事
郑晓东:男,1978年生,硕士研究生学历,浙江大学法学学士学位、英国南安普顿大学海商法硕士学位,执业律师。现任公司独立董事、金诚同达律师事务所高级合伙人、上海金融与法律研究院研究员,北京三元食品股份有限公司、宁波联合集团股份有限公司、荣盛石化股份有限公司独立董事,曾任职于英国诺顿罗氏律师事务所、浙江天册律师事务所,曾任河北银行独立董事。2023-07-01 04:02:141
唐亮是哪里人?东信和平董事
唐亮:男,1984年出生,中国共产党党员,本科学历,毕业于苏州大学。现任珠海市香洲正方控股有限公司董事长兼总经理、珠海市正方创业投资有限公司总经理,曾任珠海市香洲正方控股有限公司副总经理、珠海正方公共资源运营有限公司总经理。2023-07-01 04:01:551
郑州航空港区智能手机产业园有哪些公司
郑州航空港区智能手机产业园有东信和平科技有限公司,维沃移动通信有限公司,灵盛电子股份有限公司。1、东信和平科技有限公司:主营业务为手机生产,是一家拥有自主知识产权的高科技企业。2、维沃移动通信有限公司:是一家专注于移动通信设备研发、制造和销售的高科技企业。3、灵盛电子股份有限公司:是中国领先的手机摄像头模组供应商之一,专注于手机、PC、摄像机和汽车产品等领域的视觉解决方案。2023-07-01 04:01:481
任勃是什么职称?东信和平财务总监
任勃:男,1970年生,本科学历,高级会计师。现任东信和平副总经理兼财务总监、东信和平(印度)有限公司董事、东信和平(新加坡)有限公司董事、东信和平智能卡(孟加拉国)有限公司董事、东信和平(俄罗斯)有限公司董事。曾任中国包装进出口浙江公司财务部,普天东方通信集团有限公司财务部会计师,东信和平财务部副经理、总经理等职。2023-07-01 04:01:411
楼水勇是哪个公司的?东信和平董事
楼水勇:男,1975年生,硕士研究生,高级会计师。现任公司董事、普天东方通信集团有限公司副总裁、东方通信股份有限公司董事、普天轨道交通技术(上海)有限公司董事、杭州东方通信软件技术有限公司董事、杭州东信北邮信息技术有限公司董事、广州邮电通信设备有限公司董事长、上海无线通信设备有限公司董事、杭州东信商贸有限公司董事长兼总经理、杭州东信创业投资有限公司董事长、杭州东信实业有限公司董事长、杭州东信光电科技有限公司董事长、杭州东方通信城有限公司董事长、杭州市西湖区人大代表、珠海普天和平电信工业有限公司董事长。曾任普天东方通信集团有限公司投资管理部业务主管、财务部业务经理、财务部总经理、副总会计师等职务。2023-07-01 04:01:351
在国泰君安开户,能使用文华财经的期货软件交易吗?
在国泰君安开户,不能使用文华财经的期货软件,不过国泰君安有和文华财经合作的期货交易软件【文华赢顺WH6】,下载方法为:1、登陆国泰君安期货官网http://www.gtjaqh.com/;2、点击【期货软件下载】;3、找到【文华赢顺WH6】,下载即可,不清楚可以点击【使用说明】。2023-07-01 04:01:348
黄小鹏做什么行业的?东信和平副总经理
黄小鹏:男,1973年生,硕士研究生学历,高级工程师。现任东信和平副总经理兼流程与信息化部总经理、技术管理部总经理,城联数据有限公司董事。曾任东方通信股份有限公司高级研发工程师,东信和平研发部经理、研发中心主任等职。2023-07-01 04:01:281
金邦达和东信和平哪个卡质量好
金邦达。1、建材不同。金邦达在做银行卡之前、是卡片的研发商推行3+1层卡片更加耐用相对于东信和平就很普通。2、年份方面。金邦达有23年的公司建设底蕴旗下的产品质量非常的有保证而东信和平只是初建的小公司、公司产品质量没有得到社会认可。2023-07-01 04:01:211
陈宗潮是什么人?东信和平董秘
陈宗潮:男,1973年生,本科学历。现任东信和平副总经理、董事会秘书兼任投资发展部总经理、总法律顾问,东信和平(俄罗斯)有限公司董事长、东信和平智能卡(孟加拉国)有限公司董事、东信和平(新加坡)有限公司董事、东信和平(印度)有限公司董事。曾任东信和平证券事务代表、总经理助理等职。2023-07-01 04:01:141
交易品种多、手续费低的知名大型期货公司有哪些?
不同交易所、不同产品期货交交易手续费率不一样,需要联系对应的交易所咨询。温馨提示:所有金融类衍生品的投资都具有风险性,对于投资者的金融风险管理能力有着较高的要求,不适合没有专业金融知识的投资者。除了基础的金融知识外,投资者还应做到自身风险承受的控制,不可盲目的进行投资。应答时间:2022-01-25,最新业务变化请以平安银行官网公布为准。2023-07-01 04:01:0112
东信和平和昆仑银行有合作吗
东信和平和昆仑银行之间没有业务合作的,其之间都是独立的开展各自的业务,没有之间的业务合作往来。2023-07-01 04:01:005
珠海东信和平上班累不累
超级累,天天加班,白班10.5小时,晚班11小时,而且还把别人的假期拿来转班,一个月不加班才拿到两三千,加班最高才拿到四千左右2023-07-01 04:00:522
5月19日有哪些股票上市流通
5月19日股票上市流通有:002872 天圣制药 603197 保隆科技 300656 民德电子 002873 新天药业2023-07-01 04:00:511
东信和平值得去吗
值得去。东信和平发展前景好,环境优越,福利待遇优越,工资高,无任何违法记录。东信和平是中央企业的行业领导者(大股东是中国普天信息产业集团有限公司)。2023-07-01 04:00:411
宋钢多少岁了?东信和平副总经理
宋钢:男,1968年生,研究生学历,高级经济师。现任东信和平副总经理兼国际部总经理、东信和平智能卡(孟加拉)有限公司董事长、东信和平(印度)有限公司董事长、东信和平(俄罗斯)有限公司董事,曾任珠海市金邦达保密卡有限公司总经理,金邦达宝嘉控股有限公司执行副总裁、珠海经济特区中安集团公司投资部项目经理、企业管理部副经理、下属制药公司总经理等职。2023-07-01 04:00:221
国内哪个期货程序化交易软件比较靠谱?
目前国内有一些比较好一点的期货程序化交易软件,这些软件在国内都是属于一些高中低端量化交易平台,对股民的投资和交易都是承载着非常大作用,一般这些平台是适合投资者进行趋势和反趋势的投资有很大的帮助。那小编就给大家聊一聊好一点的期货程序化交易软件。一、交易开拓者程序化软件交易开拓者程序化交易平台,它是一种用语言类开发策略的模型,根据账户持股的状态来进行选择,这种程序化的交易平台,在国内是以终端形式和市场推广的形式来作为一种交易的,对于期货交易来讲也是非常靠谱的,特别是这种软件一般占用率比较高,对市场的推动性是比较大的,在整个股民的交易市场来讲,都已经是承载着承上启下的作用。二、金字塔决策交易系统一般金字塔决策交易系统,它就是一个脚本语言开发的该交易系统软件还是非常的靠谱稳定,特别是在交易数据和行情发展上面都存在着非常稳定的作用,不管是承载着大数据和稍微小一点的数据交易,其量化系统是非常顶端的,所以在整个交易平台都还没出现过非常大的错误,从现阶段来看金字塔合作的期货公司也会逐渐增多,在中低端量化交易平台的市场占有率来讲,也是比较高的一个平台啊。三、国泰安量化投资平台国泰安量化投资软件,它是一款高端量化交易平台,而且各平台说兼容着很多语言开发软件,而且其平台策略交易系统比较多,而且策略比较多,对发展和数据维护方面来讲也是做了非常好的,特别是用户的投资资金的维护方面,做得非常的好,在整个程序化交易和算法交易方面都有实用性的价值,每年都还是有很多人愿意在该软件上进行交易。2023-07-01 04:00:226